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無菌隔離器是如何來滅菌的,我們一起來看看!

更新時(shí)間:2020-10-26      點(diǎn)擊次數(shù):2637
   無菌隔離器是為無菌檢查試驗(yàn)提供無菌環(huán)境的一種設(shè)備,它能較好地防止微生物污染待測(cè)樣品,可以避免試驗(yàn)用物品和輔助設(shè)備被污染,提高了無菌檢查試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,現(xiàn)已在制藥行業(yè)得到廣泛應(yīng)用。
  無菌隔離器滅菌方法
  1、菌懸液的制備
  ①取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制備成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液15ml;菌懸液平均分裝于3小藍(lán)蓋瓶?jī)?nèi),瓶口密封(包裝形式與無菌檢查供試品一致),2~8℃冰箱存放,24h內(nèi)備用。
  ②取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制備成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液15ml。菌懸液同金黃色葡萄球菌菌懸液同法分裝及保存。
  ③取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫。然后取孢子懸液至無菌試管,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的孢子懸液15ml。菌懸液同金黃色葡萄球菌菌懸液同法分裝,2~8℃冰箱存放,2月內(nèi)備用。
  2、無菌隔離器的準(zhǔn)備
  以無菌隔離器裝載量的要求將無菌檢查所需物品擺放到無菌隔離器內(nèi)部相對(duì)應(yīng)的位置;無菌隔離手套及艙體密封性測(cè)試合格;運(yùn)行參數(shù)已確認(rèn)。
  3、過氧化氫氣體濃度及分布狀態(tài)確認(rèn)
  取19支過氧化氫蒸汽化學(xué)指示劑編號(hào),放入無菌隔離器的手套部位、進(jìn)出風(fēng)口、風(fēng)扇背部、艙體上下四角及垃圾桶底部,滅菌完成后觀察變se情況。
  4、BI挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)
  取13支過氧化氫滅菌生物指示劑(嗜熱脂肪芽孢菌片)分布于無菌隔離器的8個(gè)手套部位、左右艙門、艙體操作臺(tái)面的左右及垃圾桶底部,滅菌完成后菌片取出接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中,56℃培養(yǎng),培養(yǎng)7天,觀察培養(yǎng)物的生長(zhǎng)情況,同時(shí)取未經(jīng)滅菌的生物指示劑3片同法接種,作為陽(yáng)性對(duì)照。
  5、無菌隔離器開啟滅菌
  開啟無菌隔離器的自動(dòng)運(yùn)行程序,依次按照“自動(dòng)除濕”、“自動(dòng)調(diào)節(jié)”、“自動(dòng)滅菌”、“自動(dòng)通風(fēng)”、“自動(dòng)保壓”五個(gè)階段完成運(yùn)行程序。
  6、沉降菌檢測(cè)
  取胰酪大豆胨瓊脂平皿培養(yǎng)基15個(gè),擺放在隔離器艙體操作臺(tái)面上,臺(tái)面兩側(cè)各放置6個(gè)平皿,臺(tái)面左右兩側(cè)各放置1個(gè)平皿,垃圾桶底部放置1個(gè)平皿。平皿暴露采樣4小時(shí),同時(shí)取3只培養(yǎng)基作空白對(duì)照,采集完的培養(yǎng)基及空白對(duì)照培養(yǎng)基置于20~25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后,再轉(zhuǎn)入30~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),記錄培養(yǎng)皿中菌落數(shù)量。
  7、浮游菌檢測(cè)
  取樣點(diǎn)為隔離器操作平臺(tái)的左右各1個(gè)點(diǎn),使用胰酪大豆胨瓊脂平皿,在取樣點(diǎn)工作區(qū)附近放置取樣器,進(jìn)行空氣取樣,各取樣點(diǎn)的取樣量為1000升,同時(shí)取3只培養(yǎng)基作空白對(duì)照,采集完的培養(yǎng)基及空白對(duì)照培養(yǎng)基置于20~25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后,再轉(zhuǎn)入30~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),記錄培養(yǎng)皿中菌落數(shù)量。
  8、表面微生物的檢測(cè)
  取胰酪大豆胨瓊脂接觸碟培養(yǎng)基6個(gè)分別對(duì)隔離器艙體內(nèi)表面的上部、下部、左部、右部、前部、后部進(jìn)行接觸10秒采樣;取胰酪大豆胨瓊脂接品平皿培養(yǎng)基(TSA)分別對(duì)8個(gè)手套指模進(jìn)行取樣,同時(shí)取3只培養(yǎng)基作空白對(duì)照,采集完的培養(yǎng)基及空白對(duì)照培養(yǎng)基置于20~25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后,再轉(zhuǎn)入30~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),記錄培養(yǎng)皿中菌落數(shù)量。
  9、選擇性微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)
  ①試驗(yàn)組一:選擇性微生物菌懸液,小瓶密閉分裝后經(jīng)無菌隔離器過氧化氫蒸汽滅菌,接種計(jì)數(shù)。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌菌懸液各1ml接種于TSA上,平行接種兩次,30~35℃培養(yǎng)48~72小時(shí),菌落計(jì)數(shù),取平均值;取白色念珠菌、黑曲霉菌懸液1ml接種至沙氏葡萄瓊脂培養(yǎng)基上,平行接種兩次,30~35℃培養(yǎng)3~5天,菌落計(jì)數(shù),取平均值。
  ②試驗(yàn)組二:選擇性微生物菌懸液,小瓶密閉分裝后經(jīng)無菌隔離器過氧化氫蒸汽滅菌,并在滅菌完成后拆開菌懸液瓶口,使內(nèi)容物在無菌隔離器內(nèi)暴露5min,然后同試驗(yàn)組一同法接種計(jì)數(shù)。
  陽(yáng)性對(duì)照組:取保存在冰箱內(nèi)同批制造的選擇性微生物菌懸液,同試驗(yàn)組一同法接種數(shù)。
  陰性對(duì)照組:另取0.9%無菌氯化鈉同法接種于TSA及沙氏葡萄瓊脂培養(yǎng)基上,作為陰性對(duì)照組。無菌隔離器
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